在蛋白和抗體純化工作中，如何準(zhǔn)確的進(jìn)行定量一直是一個棘手的問題。傳統(tǒng)的方如Bradford，BCA等操作繁瑣，耗時長，而通過測定蛋白質(zhì)的紫外吸收來定量，則非?？焖俜奖恪?/p>

蛋白質(zhì)擁有的紫外吸收性質(zhì)是來自芳香族氨基酸如色氨酸、酪氨酸分子內(nèi)含有共軛雙鍵，在280納米波長附近具有最大的光吸收峰。由于大多數(shù)蛋白質(zhì)均含有酪氨酸、色氨酸殘基，所以測定蛋白質(zhì)在280納米波長處的吸光度，是分析溶液中蛋白質(zhì)含量的一種最快速簡便的方法。

其優(yōu)點(diǎn)是快速，對樣品無破壞，缺點(diǎn)在于此法是根據(jù)酪氨酸（Tyr），苯丙氨酸（Phe），色氨酸（Trp）殘基的強(qiáng)吸收值來測定的，不同的蛋白質(zhì)其含量不同，所以當(dāng)?shù)鞍字腥狈@幾種氨基酸時，定量就不準(zhǔn)了，就得考慮其他方法。另外核酸，和其他所有含有苯環(huán)共軛π鍵的物質(zhì)（如蛋白洗脫用的咪唑）都會影響其定量，在測定前應(yīng)先透析除去。

一、如何利用微量分光光度計(jì)來測定蛋白濃度

01  首先打開軟件，選擇Protein A280。

02  再在右上角選擇樣品的類型，1Abs=1mg/ml為測定未知蛋白的選項(xiàng)（如果是測試抗體濃度，可以選擇igG預(yù)設(shè)參數(shù)，大部分廠家的設(shè)備都含有這個參數(shù)）。

03  然后用純水將比色皿清洗三次，選擇合適的溶液作為背景，滴入2μl，按blank減去背景。再用純水將比色皿清洗三次，滴入2μl樣品，按measure測定。下方就會顯示樣品的A280值即為濃度。

04  到這一步還沒完！

還需要到https://web.expasy.org/protparam/，上輸入蛋白的序列來查找消光系數(shù)，用測得的A280除以該蛋白的消光系數(shù)，才是最終的準(zhǔn)確濃度。

菲恩生物嚴(yán)格把控每一個生產(chǎn)的蛋白或抗體產(chǎn)品的質(zhì)量，質(zhì)控方面使用傳統(tǒng)的SDS-Page膠染色,對比標(biāo)準(zhǔn)品濃度的BSA蛋白，確定濃度和純度，同時參考全進(jìn)口微量分光光度計(jì)以獲得最準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，讓產(chǎn)品在純度和濃度上不會出現(xiàn)偏差。

二、舉例菲恩生產(chǎn)蛋白驗(yàn)證的過程的結(jié)果圖(DOG43為蛋白編號)

01  12%SDS-PAGE驗(yàn)證（其中BSA標(biāo)準(zhǔn)品為1mg，上樣10ul）

02  DOG43蛋白序列進(jìn)行分析，計(jì)算消光系數(shù)。

03  微量分光光度計(jì)濃度測定結(jié)果。